數量：大量
規格：0.5mL

探針標記專用PCR MIX添加DMSO或者使用修飾化的堿基以及使用LA－Taq來擴增PCR這些在我也都做過，不過都正如你所說，都是直接擴增基因組或cDNA.

而高GC含量影響反轉錄也是肯定的，因為高GC肯定容易形成復雜的二級結構，這些可以參見《分子克隆》。“我至今沒有聽說高GC含量會不利于逆轉錄，有一個證據就是在FMDV基因組RNA中有長達500bp的GC tail，探針標記專用PCR MIX這個病毒的全基因組一樣被測序出來”，但這并不能說明逆轉錄沒有遇到麻煩，人家不會告訴你經過怎樣的過程才測出來的。比如，對高GC含量的模板測序會比較困難吧，可是你到網上搜一搜，高GC含量的區域多的是，不然的話我也不無法預測我的基因5‘端有一個高GC區了是嗎？我們不能因此就推出GC含量高不影響測序吧？我自己的例子也證明了高GC含量影響逆轉錄的，因為無論是篩庫還是RACE，都是只能拿到此區域的相鄰3’區，而可以肯定的是，所得到的一定不是全長，可見肯定是由于逆轉錄不過去。在搜一下文獻，可以得出我的結論的。所以我現在最大的困難在于反轉錄，而不是PCR。

探針標記專用PCR MIX首先檢查一下你的基因片斷大小以及回收量（應該不是很大，所以回收的量很可能太少），太小的片斷不容易連，如果是這樣建議使用好的感受態，或增大回收的量。其次看一下你回收時所用的紫外，波長是否小于314nm，如果是建議使用314以上的，并且操作時間盡量減短。第三，建議將回收產物普通Taq加A，不需回收，再連一次。最后，檢查一下感受態。還有，如果T－easy存放時間過長，建議使用新的。 

難度不出很大。探針標記專用PCR MIX如果誘變的位點在基因中間，你可以用一個突變引物先引入突變；然后用這個突變體做一側的引物（大引物），與另一個引物一起，以野生型基因為模板擴增。我們用這種方法做出來多個突變體。

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