青鏈霉素溶液
數量:大量
保質期:一年
保存條件:-20℃保存
規格:100mL
酵母與原核之間在重組蛋白的生產成本上的比較要看具體情況。青鏈霉素溶液傳統的釀酒酵母與大腸桿菌相比產量多數情況下處于劣勢。但畢赤酵母高密發酵特性突出,表達量則常常超過大腸桿菌系統,如果實現高效分泌表達,則純化成本非常低,具有生產成本優勢。但畢赤酵母的胞內表達在純化方面則不一定有優勢。
青鏈霉素溶液除了用于規模化生產重組蛋白之外,畢赤酵母還在基礎研究方面發揮著重要 作用,比如表達蛋白用于結構分析,信號傳導途徑研究,當然也包括酶學研究。用酵母或原核系統對于活性未知的酶進行研究的例子少,一般酶活鑒定往往是用天然的蛋白解決的。
如果需要,完全可以利用畢赤酵母進行酶活性的探索,從以往的戰績來看,畢赤酵母表達表達成功的例子實在是太多了,青鏈霉素溶液比例也很高,雖然仍存在風險。
1)原核誘導時間,從你的結果來看,誘導1-5小時變化不大,時間點影響較小,取3小時沒有問題。很多情況下,溫度對可溶性影響較大,不知道你30度誘導的可溶性如何?如果蛋白主要是可溶性的,那進一步降低誘導溫度的意義也就小了。如果仍有較多的包含體,青鏈霉素溶液倒是可以再降低一下誘導溫度。此外,很多蛋白包含體復性后有活性,如果可溶性表達困難或表達量太低,仍可以考慮包含體復性策略。
2)酵母細胞的破壁可以采用機械法,也可以采用酶法。機械法主要是高壓勻質和珠磨,主要用于中試和生產,但有的儀器也可以兼顧實驗室規模,這兩種方法效率較高。酶法主要用于制備球形體,是一種外源基因高效轉化的方法,青鏈霉素溶液但用于破壁檢測表達則成本太高,此外使用酶破壁也會引入雜蛋白。我查過一篇文獻,是小量裂截用于表達檢測的,我沒有直接作過,但我們實驗室的研究生反映還可以。
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