兔子促黃體激素(LH)elisa試劑盒雙抗體夾心 ELISA 法定量測定人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量。

試劑盒的組成：

組成： 

（1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（4）酶的底物；

（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；

（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）

用途：科研與實(shí)驗(yàn)專用試劑，不得用于臨床診斷。

檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。

標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。

儲存方式
標(biāo)本的采集與保存：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆�，如有特殊原因需要周期收集�?biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。                                 

◇液體類標(biāo)本：                                 

    標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。                                 

◇血清：         

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。         

◇血漿：         

　　  應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。         

◇尿液、胸腹水、腦脊液：         

  　　用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。         

◇細(xì)胞培養(yǎng)上清：         

 　　檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。         

◇組織標(biāo)本：                 

  　　切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。                 

4. 細(xì)胞裂解液：

1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；2）將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗 3 次；

3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：

i 超聲破碎：取適量 PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。

ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20℃ 以下冰凍，室溫融解，反復(fù) 3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。

4）將標(biāo)本于 2-8℃ 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃ 或-80℃ 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)本均需密封保存，4℃ 保存應(yīng)小于 1 周，-20℃ 不應(yīng)超過 1 個月，-80℃ 不應(yīng)超過 2 個月。

2. 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。

3. 標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

試劑準(zhǔn)備

1.使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫 （18-25℃），試劑不能直接在 37℃ 溶解。

2.標(biāo)準(zhǔn)品 （凍干品）：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1 mL，蓋好后室溫靜置大約 10 分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為 1000pg/mL。準(zhǔn)備 7 個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的 EP 管，每個 EP 管中加入 500μL 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成 1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL，31.2pg/mL，15.6pg/mL，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 （0pg/mL） 直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.檢測溶液 A 及檢測溶液 B：Detection A 及 Detection B 在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。臨用前分別以檢測稀釋液 A 或 B1:100 稀釋 （如：10μL 檢測溶液 A/990μL 檢測稀釋液 A），充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制 （100μL/孔），實(shí)際配制時應(yīng)多配制 0.1-0.2 mL。

4.濃洗滌液：用 580 mL 蒸餾水或去離子水將 20 mL 濃洗滌液稀釋至 600 mL，進(jìn)行 30 倍稀釋。

5.底物溶液：請用滅菌的移液器吸頭吸取所需體積的 TMB 至另一干凈容器中使用，容器中剩余的底物應(yīng)予丟棄，不要倒回 TMB 瓶中。

注意：

1、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋不能直接在板中進(jìn)行。

2、 標(biāo)準(zhǔn)品請于臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。該標(biāo)準(zhǔn)品只能使用一次。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液 A 工作液、檢測溶液 B 工作液請使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆�；靹驎r要輕輕充分混勻，避免起泡。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確請使用微量吸管，并校準(zhǔn)微量加液器。請依據(jù)所需的量精確配制，盡量不要微量配制 （如吸取檢測溶液 A 時，一次不要小于 10μL），以避免造成濃度誤差。

4、 請勿重復(fù)使用已經(jīng)稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液 A 工作液和檢測溶液 B 工作液。

5、 濃洗滌液中如有結(jié)晶析出，請先溫育至室溫，輕輕混勻，至到結(jié)晶完全溶解再進(jìn)行配制。

6、 試劑盒中部分試劑為儲存液，客戶需配置成工作液后使用，在配置過程中如因純凈水質(zhì)量差或水質(zhì)污染，以及實(shí)驗(yàn)中所用耗材潔凈度差，可能造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)
兔子促黃體激素(LH)Elisa試劑盒訂購說明
1.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。

2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。

4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素 較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

7.建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

操作步驟

1.加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔、空白孔。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 7 孔，依次加入 100μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 （見試劑準(zhǔn)備 2）�？瞻卓准� 100μL（見試劑準(zhǔn)備第二步最后一管），余孔加待測樣品 100μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃ 溫育 2 小時。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。

3.每孔加檢測溶液 A 工作液 100μL（臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃ 溫育 1 小時。

4.棄去孔內(nèi)液體，每孔用 300μL 的洗滌液洗滌，浸泡 1-2 分鐘，吸去 （不可觸及板壁） 或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次 （也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干），重復(fù)洗板 3 次。最后一次洗滌后，要把孔內(nèi)的洗滌液完全甩干。自動洗板機(jī)亦可。

5.每孔加檢測溶液 B 工作液 （臨用前配制）100μL，加上覆膜，37℃ 溫育 1 小時。

6.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 5 次，方法同步驟 4。

7.每孔加底物溶液 90μL，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃ 避光顯色 （反應(yīng)時間控制在 15-25 分鐘，不要超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔梯度不明顯時，即可終止）。

8.每孔加終止溶液 50μL，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現(xiàn)顏色不勻一，請輕輕晃動酶標(biāo)板以使溶液混合均勻。

9.在確保酶標(biāo)板底無水滴及孔內(nèi)無氣泡后，立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度 （O.D. 值）。

注意：

1.試劑準(zhǔn)備：準(zhǔn)備一次實(shí)驗(yàn)所需要的酶標(biāo)條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說明書要求保存，以備下次使用。

2.加樣：實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。加樣時注意不要有氣泡，將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的「預(yù)溫育」時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。因此，一次加樣時間 （包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品） 最好控制在 10 分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時請將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)，洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)，同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。

4.洗滌：充分的洗滌非常重要，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液完全甩干。洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí) 驗(yàn)過程中。

5.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化 （比如，每隔 10 分鐘觀察一次），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

6.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

7.如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)濕度低于 60%，推薦使用加濕器提高濕度水平。

典型數(shù)據(jù)

為了便于計(jì)算，盡管濃度為自變量而 O.D. 值為因變量，我們繪圖時仍采用標(biāo)準(zhǔn)品的 O.D. 值作為橫坐標(biāo) （X 軸），標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo) （Y 軸）。同時為了試驗(yàn)結(jié)果的直觀性，圖中提供的是原始數(shù)據(jù)而非對數(shù)值。推薦使用對數(shù) 值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和溫度條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的 O.D. 值會有所差異。所提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需要根據(jù)自已的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

兔子促黃體激素(LH)Elisa試劑盒用于檢測  IL21，經(jīng)檢測與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。
由于受到技術(shù)及樣本來源的限制，不可能完成對所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。
穩(wěn)定性
經(jīng)測試兔子促黃體激素(LH)Elisa試劑盒因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。

       公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。

      本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到。